모든 내용은 Gene Cloning and DNA Analysis, 6th edition, T.A.Brown, Wiley-Blackwell을 참고하여 작성하였습니다.
본 글의 제목은 언급된 도서의 각 챕터의 절 이름과 동일합니다.
대부분의 그림 역시 본 책에서 왔으며, 그 이외에는 따로 표시합니다.
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Chapter 6
Cloning Vectors for E. coli
6.2 Cloning vectors based on M13 bacteriophage
Replication origin만 있으면 정상적인 작동이 가능한 plasmid와 달리 phage는 많은 단백질 생산 유전자를 필요로 하므로 vector 구조가 복잡함. 즉 insert DNA나 selection gene을 넣을 공간이 제한되어 있음
How to construct a phage cloning vector
M13은 6.4kb로 10개의 gene을 가짐
M13mp1: Intergenic sequence에 lacZ’ gene을 가져 selection 가능
M13mp2: lacZ’ gene에 silent mutation을 일으켜 EcoRI site를 만듦. Selection, gene insertion 가능
M13mp7: EcoRI 등의 restiction site를 여러 종류 포함한 polylinker를 lacZ’ gene에 삽입. M13mp2보다 훨씬 자유롭게 이용 가능. Polylinker는 palindromic seq로 만들어져 BamHI, SalI, PstI를 이용해 삽입된 gene은 나중에 EcoRI으로 잘라 빼낼 수 있음
M13mp8: pUC8과 같은 MCS를 가짐. 서로 다른 sticky end를 가지는 DNA 도입 가능
M13mp9: M13mp8의 반대 서열의 polylinker를 가짐
Hybrid plasmid-M13 vectors
M13 vector는 여전히 1.5kb의 gene밖에 도입하지 못하는 한계점을 가짐
Phagemid: M13 genome 일부를 plasmid에 결합하여 만든 DNA
pEMBL8는 M13 DNA 중 dsDNA를 ssDNA로 바꾸어주는 signal sequence를 가지는 plasmid
여기에 gene을 도입(10kb까지 가능)하고 signal sequence에 의해 plasmid가 ssDNA가 되고, 이것이 helper phage가 만든 단백질들에 의해 capsid 안에 조립되어 많은 phage particle이 만들어짐
lacZ’ gene을 가지므로 X-gal을 배지에 넣어 screening 가능 → White plaque
